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酵母蛋白表達
酵母是單細胞低等真核生物，既具有原核生物細胞生長速度快、容易培養、操作簡單等優點，又具有真核生物對蛋白質的加工和修飾等功能。作為被研究的最多的真核生物，很早就被應用于異源蛋白的表達。與原核表達系統比較，酵母由于存在真核生物的蛋白修飾系統，易于表達出活性良好的蛋白；與其它真核表達系統如昆蟲、動植物細胞等相比其具有快速、簡便、成本低等優勢。用作蛋白表達宿主酵母菌主要有釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 、多形漢遜酵母(?Hansenula polymorpha) 、畢赤酵母(Pichia pastoris) 以及耶羅維亞酵母(?Yarrowia lipolytica)等，其中以釀酒酵母和畢赤酵母的研究和應用最為廣泛。?
酵母蛋白表達
重組蛋白表達與純化技術服務（P. Pichia表達系統）
重組蛋白有很多的應用，包括抗原制備、蛋白相互作用、酶學分析、以及藥物靶點研究。選擇合適的蛋白表達系統，對下游蛋白的應用有重要影響。蛋白功能、產率、成本是優先考慮的幾個因素。
三羊開肽生物科技有限公司建立了嚴格的產品質量體系及一整套完善的客戶服務流程、保密制度，以確保為客戶提供優質的產品和成熟的服務。
技術服務按步驟收費，您可以選擇從以下任意一步開始提供服務或僅選擇其中的單獨一步，詳細價格請聯系我們。
?酵母表達系統——步驟1. 目標基因亞克隆至酵母表達載體：
擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
測序驗證構建質粒的準確性。
可提供表達載體：pPICZα和pPIC9K
提供客戶：正確構建的重組表達質粒，含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。
服務周期：1周
?酵母表達系統——步驟2. P. Pichia表達菌株電轉化：
酶切線性化表達質粒。
將表達質粒通過電轉化到高效的P. Pichia表達菌株中。
利用蛋白酶去除不需要的純化標簽（Tag），再純化獲得所需的目標蛋白（可選，構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點）。
通過PCR鑒定至少挑選5個陽性克隆。
可提供表達菌株：X33，GS115，KM71和SMD1168。
提供客戶：PCR陽性克隆及PCR結果報告。
時間：1周
? 酵母表達系統——步驟3. P. Pichia表達菌株篩選：
將5個陽性克隆于BMGY培養基中擴增，然后換至BMMY培養基中，并加入甲醇誘導表達目標蛋白。
SDS-PAGE電泳檢測培養上清中目標蛋白的表達情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
如果培養上清中檢測不到表達，則通過將上清濃縮20倍作用再檢測，或通過Western-blot方法檢測目標蛋白表達（客戶需要提供相關抗體）。
提供客戶：任意一個客戶需要的陽性克隆菌株及表達篩選結果報告。
時間：2周
?酵母表達系統——步驟4. P. Pichia表達菌株表達優化：
挑選20個陽性克隆進行常規表達篩選，并對其中表達最好菌株優化表達條件。
對挑選出來的單克隆菌株，優化培養及誘導條件（培養基，菌體密度，甲醇濃度，誘導時間等），提高目標蛋白的表達量。
提供客戶：任意三個客戶需要的陽性克隆菌株及優化表達條件結果報告。
時間：2周
?酵母表達系統——步驟5.目標蛋白表達及純化：
搖瓶培養1L重組酵母菌，誘導表達目標蛋白。
通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
提供客戶：純化好的目標蛋白1~10mg及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽（Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。
時間：2~3周
?酵母表達系統——步驟6.目標蛋白的再加工及詳細檢測
對生物學活性要求較高的純化后蛋白產品進行復性研究。
內毒素去除，除菌，凍干等進一步加工。
通過HPLC，質譜等方法詳細檢測目標蛋白的質量。
服務內容：
1.復性研究：
利用多達18種不同復性緩沖液的體系，對目標蛋白進行小量復性試驗提供復性后樣品供客戶檢測。
可根據客戶要求，按照其中一種樣品的復性條件制備小量的復性蛋白。
可提供具體的復性緩沖液配方及復性工藝。
2.除內毒素
3.過濾除菌
4.凍干
5.HPLC檢測
6.質譜檢測
提供客戶：加工后的終產品及相關實驗和檢測報告。
時間：1~2周
?酵母表達系統——步驟7. 大規模制備
提供客戶：合格的目標蛋白及服務報告。
時間：協商
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